Правим и PCR експерименти, защо резултатите винаги са много по-лоши от другите?

Правим и PCR експерименти, защо резултатите винаги са много по-лоши от другите?

В лабораторията погледнете PCR на другите хора, ефективността на усилване е висока, лентата за електрофореза е перфектна и погледнете собствените си, трудно за дълго време, чувствайте, че реакцията е много добра, резултат от фалшиво положителен тест ... проблемът?

Вярвам, че много от нашите партньори също са се сблъсквали с различни проблеми. Когато се сблъскаме със стена при експерименти с PCR, ние подсъзнателно ще анализираме факторите в реакционната система, но често игнорираме важното влияние на консумативите в експериментите.

Вашият PCR резултат е грешен, PCR консумативите може да са основната причина. От една страна, микро замърсяването на консумативите или въвеждането на инхибитори ще доведе до експериментално замърсяване; От друга страна, неправилният избор на консумативи също ще накара експерименталните резултати да страдат.

Проблемът идва отново. Има много видове консумативи за PCR, така че как да изберем правилните, за да направим експеримента по-плавен? На какви проблеми трябва да се обърне внимание? Не се притеснявайте, днесI в комбинация с дългогодишен опит, подреждане на често срещаните проблеми при избора на консумативи за PCR, надявам се да ви помогна.

 

В1: Защо консумативите за PCR обикновено са изработени от PP материал?

Huida: Тъй като доставките на PCR обикновено са в директен контакт с реагенти или проби, полипропиленовите (PP) материали са биологично инертни, не се придържат към биомолекули и имат добра химическа толерантност и толерантност към температура (могат да бъдат автоклапирани при 121 ° C, може да издържа и на температурни промени по време на термичния цикъл).

 

В2: Как да избера между различни размери PCR епруветки / пластини?

HUIDA: Цел на селекцията: изберете правилните продукти според специфичните експериментални изисквания. По-голямата част от размера на PCR епруветката може да отговори на изискванията на PCR реакцията. На тази основа се препоръчва първо да изберете тръба с малък обем. Тъй като реакционната тръба / плочата с малък обем има малко въздушно пространство, топлопроводимостта се подобрява и изпарението се намалява. В същото време е необходимо да се избягва добавянето на твърде много или твърде малко проби. Твърде многото може да доведе до намалена топлопроводимост, разлив и кръстосано замърсяване, докато твърде малко може да доведе до загуба на изпарение на пробата.

Спецификации и обеми на общите реакционни епруветки:

Единична / комбинирана туба: 0,5 ml, 0,2 ml, 0,15 ml

Плоча с 96 ямки: 0,2 ml, 0,15 ml

Плака с 384 ямки: 0,04 мл

 

В3: Когато количеството на пробата е малко, ще избера единична или комбинирана тръба, но защо някои имат плосък капак, а други са изпъкнали?

Huida: Когато количеството на пробата е малко, единичната или комбинираната епруветка ще бъдат предпочитани. Когато обаче обемът на реакцията е голям, единичната епруветка е доминираща и обемът може да достигне 0,5 ml. И плоският капак и изпъкналият капак имат предимството, като конкретните могат да се отнасят до следната информация.

Единична туба: 0,2 ml и 0,5 ml; Може да избира гъвкаво количество проба.

Свързваща тръба: 0,2 ml или 0,15 ml не е задължително; Често се срещат 8 или 12 тръби.

Плосък капак: може да осигури точно предаване на флуоресцентен сигнал за qPCR; Лесни за писане марки.

Изпъкнал капак: контакт с горещия капак на PCR инструмента, за да се намали деформацията на реакционната тръба, причинена от натиск; Това обаче ще повлияе на предаването на флуоресцентния сигнал и не може да се приложи към експеримента qPCR.

 

В4: Защо някои PCR плочи имат поли, а някои нямат?

Huida: Всъщност полата на PCR плочата е проектирана да се адаптира по-добре към приложенията за автоматизация, като осигурява стабилна опора и механична издръжливост на инструмента, както и по-висока стабилност по време на процеса на пипетиране.

PCR плаките обикновено се разделят на не-хемлин, полу-хемлин и пълен хемлин.

Без Плоча: Подходяща за повечето PCR машини или qPCR машини, но не и за приложения за автоматизация. Стабилността не е висока в процеса на пипетиране, така че трябва да се използва с плоча.

Половината на ръба на полата: може да се адаптира към нанасяне на етикет или баркод и автоматично нанасяне и има добра стабилност при пипетиране.

Пълна ръбова планка: много подходяща за автоматизирани експериментални приложения, може също да бъде адаптирана към етикета и приложението на баркод. Той има добра механична якост, може да се използва в изпъкналия модул PCR инструмент и има висока стабилност в процеса на пипетиране.

 

Q5 :За PCR плочите защо ъглите и етикетите не са съвсем еднакви?

Хуида: Зависи от ефекта на изрязването на ъгъла и маркировката.

Ъглово рязане: Изборът на ъглова позиция за рязане на PCR плоча зависи от изискванията на подходящия инструмент за лесно позициониране.

Идентификация: Буквено-цифровите маркери върху PCR плаките помагат да се идентифицират отделни кладенци и места за проби. Обикновено за релефно цветно цифрово лого или гравирано лого. За някои автоматизирани приложения отпечатаните и маркирани реакционни плочи са по-добре запечатани.

 

В6: Защо някои PCR плочи са изпъкнали, докато други са плоски? Кое е по добре?

Хуида: Това, което е най-подходящо. Има два вида често срещани PCR плочи: плосък ръб на порите и висок ръб на порите.

Реакционна плоча с маркер с плосък отвор, подходяща за повечето PCR апарати.

Реакционните плочи с издигащи се краища на отвора улесняват запечатването на мембраната и намаляват риска от кръстосано замърсяване между пробите.

 

Huida има дългогодишен опит в производството и обработката на PCR продукти и индустриални високи стандарти. Продуктовата линия е богата и може да отговори на по-голямата част от експерименталните приложения на PCR. Елате и изберете правилните продукти за вашите експериментални приложения.

谷歌推广疫情产品PCR


Време за публикуване: юни-03-2021